99久久精品毛片免费播放高潮 I 日本道色综合久久 I 国产精品一区视频网站 I 欧美国产日韩视频 I 正在播放国产乱子伦最新视频 I 中文字幕久久伊人 I 久久15p I 国产欧美va欧美va香蕉在线线 I 国产精品啊啊啊 I 国产成人61精品免费看片 I 成人亚洲天堂 I 美女胸又黄又 I 日批免费在线观看 I 亚洲自拍高清 I 国产精品情侣 I 午夜伦情 I 国产精品一区二区三区免费 I 男人的天堂伊人网 I 国产乱码一卡二卡3卡4卡网站 I 久久国产亚洲精选av I 亚洲欧美日韩国产综合精品二区 I 欧美牲交a欧美牲交aⅴ一 I 午夜无人视频美女写真视频在线观看 I 欧美精品二区 I 亚洲午夜无码久久久久软件 I 最新av免费观看 I 国产sm鞭打折磨调教视频 I 欧美啪啪大片 I 80s小说网 www.80s2.com I 欧美第一浮力影院 I 国产特级黄色片

細(xì)胞的復(fù)蘇

 
細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。

一. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。

3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
    二．取出凍存管：

1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。

2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
    三．迅速解凍：

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
    四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min 
    五.制備細(xì)胞懸液：

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。
    六.細(xì)胞計(jì)數(shù)：細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
    七.培養(yǎng)細(xì)胞：

將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)（或者24-48小時(shí)）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。

初學(xué)者易犯錯(cuò)誤：

1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。

2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳，使融化時(shí)間延長(zhǎng)。

3.離心前忘記平衡，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。

4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。